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雄鼠細(xì)胞膜分離操作步驟

時間:2015年12月22日 信息來源:湘智離心機(jī) 字體: 打印此頁

    實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:      樣品:雄鼠空腹12h      試劑:生理鹽水              0.25mol/L 蔗糖溶液(含0.3mol/LCacl2)              0.34mol/L 蔗糖溶液(含0.3mol/LCacl2)     儀器:常規(guī)的分離細(xì)胞膜的離心機(jī)。
    實(shí)驗(yàn)步驟: 
雄鼠細(xì)胞膜分離操作步驟 取空腹12h雄鼠     1、取空腹12h雄鼠處死,放血。解剖取肝臟,迅速用生理鹽水洗凈,用濾紙吸干。取3g肝臟剪碎,經(jīng)冷的0.25mol/L 蔗糖溶液洗滌數(shù)次,加18ml預(yù)冷0.25mol/L 蔗糖溶液勻漿,用雙層尼龍膜過濾,備用。

雄鼠細(xì)胞膜分離操作步驟

放入離心管


    2、將勻漿的放入離心管中,沿壁小心加入等體積的0.34mol/L 蔗糖溶液覆蓋于樣品上,以700g離心10分鐘

雄鼠細(xì)胞膜分離操作步驟

離心機(jī)上進(jìn)行分離


    3、將離心沉淀以0.25mol/L 蔗糖溶液洗滌, 1000g(3500r/min)離心10min,重復(fù)一次。

雄鼠細(xì)胞膜分離操作步驟

用于實(shí)驗(yàn)的離心機(jī)


    4、離心后沉淀為細(xì)胞核,其上有一較疏松的上層,小心吸出此上層,懸于密度d20為1.16的蔗糖溶液(51g/L)中,移入離心管,沿壁加密度d20為1.18的蔗糖溶液(51.5g),覆蓋在樣品層上層。700g(3000r/min)離心10min,細(xì)胞膜組分位于兩層溶液界面,小心吸出,置低溫保存,以備進(jìn)一步分析。



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